技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,用直接法測(cè)定抗體,不能直接用酶符號(hào)測(cè)定抗體,然后直接加入底物。而要加酶標(biāo)抗抗體呢?如果將酶符號(hào)應(yīng)用于待測(cè)抗體,直接法比經(jīng)典法更復(fù)雜,在探索符號(hào)條件時(shí),不能保證抗體因誤操作而失活;酶標(biāo)二抗目前已較為常見(jiàn),被規(guī)?;a(chǎn),購(gòu)買后使用方便。如果你直接做好了,方法已經(jīng)優(yōu)化了,d一抗二抗顯色,總時(shí)間加起來(lái),結(jié)果不會(huì)超過(guò)2到3小時(shí)??梢允褂弥苯覧LISA法,即抗體包板用來(lái)在抗原上標(biāo)記酶,然后顯色,這與直接方法相比,減少了一步的時(shí)間,縮短了時(shí)間。然而,直接法和直接法...
ELISA試劑盒在實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中,得通過(guò)不同的設(shè)計(jì),不好走和方法都是有很多種類的,像是接法、競(jìng)爭(zhēng)法、雙位點(diǎn)一步法、捕獲法測(cè)IgM抗體、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。今天小編就跟大家講講ELISA方法設(shè)計(jì)都有哪些原理嗯?ELISA試劑盒以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果...
要完成一項(xiàng)漂亮的ELISA實(shí)驗(yàn),不光要做足實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備,還要對(duì)其他各種輔助材料有所了解,這其中防腐劑的運(yùn)用很重要,ELISA試劑盒中常用的防腐劑有:1.疊氮鈉是HRP的抑制劑,凡是和HRP接觸的試劑,一定不能用;2.硫柳汞在ELISA試劑中可普遍使用,但因其有毒,較少使用;3.市面許多試劑盒產(chǎn)品,用抗生素做防腐劑較多,如慶大。4.如果試劑僅在實(shí)驗(yàn)室短期使用,其實(shí)并不需加防腐劑,常規(guī)試劑放4度冰箱,抗體、酶等加甘油分裝凍存即可。5.防污染可添加0.02%的疊氮鈉,或0.01%的硫...
ELISA試劑盒收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。ELISA試劑盒樣本的處理方式:1、組織提取液、肺泡灌洗液等,采集后離心分離,800-1000rmpx5min,取上清,-20℃或4℃保存?zhèn)溆?2、胃液、唾液、尿液的采集方式一般現(xiàn)采現(xiàn)用,胃液、唾液一般采集時(shí)間是空腹采集,一般隔夜尿不采集;3、采集血清時(shí),一般要加入總體積1%的抗凝劑,采集后先室...
咱們?cè)谶\(yùn)用ELISA試劑盒96孔板的試驗(yàn)測(cè)定的時(shí)分,常發(fā)現(xiàn)有“邊緣效應(yīng)",也就是外周孔顯色較基地孔深。經(jīng)研究證真實(shí)溫育中的熱力學(xué)梯度也許是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導(dǎo)體,在試驗(yàn)室的常規(guī)ELISA測(cè)定中,將板從室溫(通常在25℃擺布)置于37℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與基地孔之間也許存在一熱力學(xué)梯度。因而運(yùn)用水浴或在將反響溶液參加至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地掃除“邊緣效應(yīng)",而且可進(jìn)步測(cè)定的重復(fù)性。ELISA試劑盒還有就是在試驗(yàn)中...
今天我給大家講講ELISA試劑盒常壓滅菌的操作關(guān)鍵:(1)進(jìn)鍋不擠壓:擺放待滅菌的菌種袋必須分層,每層菌種袋不行擺太擠,要留一定空地,不能彼此擠壓。不適宜將菌種袋臥疊,要分層立放,以確保蒸汽暢流和接種穴無(wú)缺。為了防止棉塞易潮濕,可在棉塞上蓋一層薄膜或油紙,但掩蓋物不行太大,否則會(huì)影響上基層蒸汽暢流;也可將4個(gè)菌種袋的棉塞并攏,棉塞向下一同塞到4個(gè)菌種袋的空地中,這樣塑料袋標(biāo)準(zhǔn)要加長(zhǎng),但防潮作用杰出。(2)及時(shí)滅菌:隨裝隨滅。配料到滅菌間隔時(shí)間越短越好,防止雜菌自繁。大規(guī)模出產(chǎn)...
ELISA試劑盒的應(yīng)按規(guī)則力求準(zhǔn)確在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過(guò)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在試劑盒中似不恰當(dāng)。ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),只有z貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的...
ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。由于ELISA方法靈敏,特異性強(qiáng)不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術(shù)要求,在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外,有時(shí)??梢?jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性);在此為大家解讀下ELISA試劑盒檢測(cè)受影響因素中標(biāo)本的影響。溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性??赡苁侨苎逯泻羞^(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),在洗滌...
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