首先將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

    1.實驗開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

    2.將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

    3.加樣反應：加標準品或樣本50ml/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50ml/孔，再加入50ml/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應30分鐘。

    4.洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用工作洗滌液250ml/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

    5.顯色：每孔加入底物液A 50ml，再加底物液B 50ml，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

    6.終止：每孔加入終止液50ml，輕輕振蕩混勻，終止反應。

    7.測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內完成。
 

    氯霉素快速檢測試劑盒注意事項

    1.室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

    2.在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

    3.在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

    4.混合要均勻，洗板要*，在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性。

    5.不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

    6.反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

    7.顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。